游离氨基酸样品的制备

来源: 发布时间：2014-12-09  

测定生理体液或组织、器官等生物材料和食品中的游离氨基酸时,重要的是要预先除去样品或样品提取液中的蛋白质。脱蛋白的方法很多,有沉淀法、高速离心法、超滤法‘川和离子交换法诩,等。沉淀法中又可用许多不同的沉淀剂,应用较多的有苦味酸,磺基水杨酸(SSA)、三氯乙酸和乙醇‘3,一‘2,等。Ohara431曾比较了上述常用沉淀剂和丙酮、钨酸钠、醋酸双氧铀、硫酸锌、氢氧化钡等九种蛋白沉淀剂,结果证明苦味酸、SSA和乙醉的效果佳,不过苦味酸法的丙氨酸和碱性氨基酸,特别是色氨酸结果偏低,SSA以碱性氨基酸,乙醇法则以丙、色氨酸测定见长。SSA法还有一优点,即不与荀三酮发生颜色反应,所以只要将固体SSA或3%(m/v)SSA溶液以3.759/looml或5:1(v/v)的比例加入样品,然后离心除去蛋白,调节pH后即可上机。
　　随着柱前衍生HPLC法的发展,乙醇、甲醇沉淀、高速离心和超滤法以及这些方法的结合日趋广泛。比较了OPA/HPLC法测定生物样品游离氨基酸时不同沉淀剂的影响。近来Davey等又阐述了PITC/HPLC法测定生理体液的情况,认为血浆、羊水用乙睛做蛋白沉淀剂为适宜,而脑脊液则用超滤法佳。在农业研究中植物组织如叶、根、籽实和浆液常用80写乙醉沉淀蛋白。
　　需要提及的是:(1)无论用哪种沉淀剂,蛋白沉淀后离心转数需>I000or/min,时间10~Zomin,否则色谱柱很易被污染;(2)注意生物材料的特点,即有时需要灭菌,令酶失活、血浆要加抗凝剂.尿则必需去氨等等;(3)样品需低温贮存(一般一15C~一20C)。

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